以国标《GB/T5009.192-2003 动物性食品中克伦特罗残留量的测定》为依据，采用HPLC作为第二法对动物性食品中的克伦特罗（瘦肉精）兽药残留进行检测。该方法灵敏度高，简单易操作，仪器维护方便，节省检测成本，是常规实验室分析的首选方案。
针对此检测，我公司为您提供整体的检测方案，具体如下：
一、仪器准备
|
仪器名称
|
品牌
|
型号
|
技术规格
|
数量
|
单价(RMB)
|
|
液相色谱仪
|
/
|
/
|
二元泵+柱温箱+自动进样器+紫外检测器+C18 250mm*4.6mm*5um
|
1
|
询价
|
|
超声波清洗器
|
国产
|
KQ3200DB
|
6L，300*150*150
|
1
|
4,680.00
|
|
水浴锅
|
国产
|
HH.S11-4
|
4联
|
1
|
1,180.00
|
|
分析天平
|
进口
|
BSA224S
|
220g,0.1mg
|
1
|
10,990.00
|
|
酸度计
|
进口
|
PH510
|
台式，带ATC探头
|
1
|
3,290.00
|
|
离心机
|
国产
|
TG16-WS
|
转数≥10000转/分钟,50ml*6
|
1
|
9,800.00
|
|
超纯水机
|
密理博
|
明澈
|
超纯水+纯水系统
|
1
|
询价
|
|
振荡器
|
国产
|
HY-5
|
振荡频率：启动－－250次/分；振荡幅度：20mm；电源：220V±10 50Hz；功率消耗：100W；最大负荷：20Kg；定时：0—120分；环境温度：-10~50℃；相对湿度：<85% ；调速回旋多用振荡器
|
1
|
1,800.00
|
|
旋转蒸发器
|
国产
|
RE-52AA
|
2L，自动升降，电子无级调速，水浴锅温度，智能数显，全透明保温、节能、防爆、防溅、防污罩
|
1
|
5,900.00
|
|
微量移液器
|
国产
|
|
单道0.5ul-10ul，可调
|
1
|
800.00
|
|
单道5ul-50ul，可调
|
1
|
800.00
|
|
单道20ul-200ul，可调
|
1
|
800.00
|
|
8道50-350ul可调
|
1
|
3800.00
|
|
移液枪头
|
国产
|
|
20-200ul，白色
|
1
|
150.00
|
|
循环水真空泵
|
国产
|
SHZ-III
|
|
1
|
1500.00
|
|
涡旋混合器
|
进口
|
Lab-dancer
|
|
1
|
600.00
|
|
一次性针管
|
国产
|
|
3ml
|
1
|
100.00
|
|
针头过滤器
|
国产
|
|
0.45um，水系
|
1
|
150.00
|
|
氮吹仪
|
国产
|
MTN-2800-W
|
12孔，干浴，含气针，不含氮气钢瓶和减压表
|
1
|
4580.00
|
|
匀浆机
|
国产
|
JJ-2
|
外形尺寸300×300×510，电机功率120W，调速范围起动~12000R/MIN，定时范围0-60min
|
1
|
998.00
|
|
固相萃取装置
|
国产
|
ASE-12
|
12孔，含无油真空泵AP-02B
|
1
|
4560.00
|
|
弱阳离子交换柱
|
国产
|
PCX1506
|
150mg,6ml,30支/包
|
1
|
1460.00
|
二、试剂准备
|
试剂名称
|
产地
|
技术规格
|
数量
|
单价(RMB)
|
|
盐酸克伦特罗标准品
|
进口
|
纯度≥99.5%，0.1g
|
1
|
1500.00
|
|
磷酸二氢钠
|
国产
|
分析纯，500g
|
1
|
15.00
|
|
氢氧化钠
|
|
500g，分析纯
|
1
|
10.00
|
|
氯化钠
|
国产
|
500g，分析纯
|
1
|
10.00
|
|
高氯酸
|
国产
|
500ml，优级纯
|
1
|
60.00
|
|
浓氨水
|
国产
|
500ml，分析纯
|
1
|
10.00
|
|
异丙醇
|
进口
|
4L，色谱纯
|
1
|
420.00
|
|
乙酸乙酯
|
国产
|
分析纯,500ml
|
1
|
18.00
|
|
甲醇
|
进口
|
4L，HPLC级
|
1
|
200.00
|
|
乙醇
|
进口
|
4L，HPLC级
|
1
|
480.00
|
三、实验过程
提取过程
1、 匀浆制备样品。将称量约10g的样品于样品罐中，称量精度达到0.01g，加入20ml 0.1mol/L的高氯酸溶液高速匀浆。此过程用到的仪器包括分析天平、匀浆机、50ml量筒。匀浆时间大约10分钟，发现没有固体肉块并且肉末均匀即可。
2、 取样。将上述制备好的样品全部转移至离心管中，可加入少量高氯酸溶液清洗样品罐，合并至离心管中。
3、 除纤维。将装有样品的离心管置于超声波清洗器中超声约20分钟，取出后置于80℃水浴中加热约30分钟，冷却后离心。此过程用到的仪器包括离心机、超声波清洗器、恒温水浴锅。
4、 离心。采用转数达10000rp/min的高速离心速度，将样品中的蛋白、脂肪离心沉淀。将上清液转移至另一个离心管中。再加入5ml高氯酸溶液洗涤沉淀，用超声波将沉淀松动，再次提取洗涤、离心，合并上清液。
5、 盐析。加入8g氯化钠，混合均匀，沉淀上述溶液中的残留蛋白和脂肪。此过程采用漩涡混合器。
6、 溶剂提取。加入25ml异丙醇和乙酸乙酯（40+60），超声、振荡提取20分钟。放置分层，将上层有机相转移至旋转蒸发瓶中。重复提取2次，合并有机系。此过程采用超声波清洗器、分液漏斗
7、 浓缩。将有机相用旋转蒸发仪浓缩至近干。此过程采用旋转蒸发仪、循环水真空泵。
8、 溶解。用1ml0.1mol/L的磷酸二氢钠溶液分多次溶解，用针头过滤器过滤后合并定容至5ml玻璃离心管中。
净化过程——此过程用到的仪器包括固相萃取装置、无油真空泵
1、 活化。一次用乙醇10ml、水3ml、磷酸二氢钠0.1mol/L 3ml、水3ml活化弱阳离子交换柱
2、 净化。将上述处理后的样品缓冲盐溶液全部通过固相萃取小柱，弃去流出液。注意流出速度。
3、 洗涤。分别用水和乙醇各4ml洗涤小柱，弃去流出液。
4、 洗脱。用乙醇与浓氨水混合溶液（98+2）6ml洗脱瘦肉精，收集洗脱液。
氮吹浓缩——此处用到的仪器氮吹仪、超声波清洗器、漩涡混合器
将上述洗脱下的溶液于氮吹仪上吹干，加入1ml流动相超声、漩涡溶解，经过过滤器过滤后上机分析。
四、色谱条件
色谱柱：XDBC18 250mm*4.6mm，5um
流动相：甲醇+0.01mol/L醋酸铵水溶液=45+55
流速：1ml/min
进样量：25微升
柱温箱：25℃
检测器波长：244nm |
