牛奶中的六六六、滴滴涕农药残留检测条件

参考标准：GB/T5009.19-2008

一、分析项目：检测乳和乳制品中有机氯农药残留

二、分析原理：

样品在丙酮和石油醚混合试剂存在的条件下，对有机氯农药残留进行充分提取，因为丙酮与水是任意比混合的，所以先用丙酮与牛奶混合，去提取牛奶中水中的有机氯农药（丙酮的极性与有机氯相似），用氯化钠破坏蛋白，使其中的有机氯释放出来，同时有利于分层，被丙酮提取。再用石油醚从丙酮中把有机氯提取过来，浓缩干后定容分析。

三、仪器条件：气相主机，ECD检测器，毛细进样口

 1、程序升温：

80摄氏度  不保持

20摄氏度/分钟  180摄氏度 保持5分钟

10摄氏度/分钟  240摄氏度  保持20分钟

2、进样口250摄氏度

3、检测器320摄氏度

4、色谱柱DB-5 30 320 0.25或者DB-1701  30*0.53*0.5（1701效果能更好）

5、选择不分流进样

不分流时间事件设置：-0.75分钟   SPL2，VALUE 0

1分钟   SPL2  VALUE 50

6、农残分析，衰减选择-6

PE气相衰减设置：-6为不衰减；0为衰减64

7、进样量：1微升

8、柱流量：1ml/min

9、尾吹：30ml/min

四、试剂

         正己烷：色谱纯；

         丙酮：色谱纯；

         石油醚：30-60℃（也可用60-90℃），色谱纯；

         苯：色谱纯；

         浓硫酸：优级纯；

         无水硫酸钠：分析纯；

         硫酸钠溶液：20g/L；

         标准品：固态a-666、b-666、r-666、d-666（林丹）、op’-DDT、pp’-DDT、pp’-DDD、pp’-DDE

五、配置标准溶液：

   1、标准储备液——单标

         分别准确称取8种农药标准品10mg（可以减半称取）于100ml棕色容量瓶中，加入少量的苯溶解（可以采用超声波加速溶解），在用正己烷定容，混合均匀。

   2、标准工作液——混标

         分别取上述单标储备液不同体积，定容至100ml棕色容量瓶中，配置成以下浓度的混合标样，配置4-5组。

具体说明如下表：

浓度单位：Mg/L  (ppm)

六、前处理设备

         超声波清洗器：一台；

         漩涡混合器：一台；

         高速离心机：≥10000转/分钟，一台；

         移液器： 20-200ul一支，100-1000ul一支

         棕色容量瓶： 100ml，15个；

         离心管： 50ml带刻度，一包；

         填装无水硫酸钠玻璃柱

 500ml分液漏斗10个

250ml分液漏斗10个

直径为5cm左右的小漏斗20个

玻璃毛一盒

一次性吸管3ml的一袋

定性滤纸一盒

50ml量筒2个

18*180的试管50个

4孔放分液漏斗架10个

5ml移液管20个

七、前处理过程（加标回收率测定）

   1、准确称量20g牛奶与500ml分液漏斗中（保证漏斗不漏），准确移取 5ml0.3ppb的混标，放入漏斗中

2、量取50ml丙酮，把分液漏斗颈端微向上，打开排气阀，把丙酮缓慢倒  入斗肚一侧，盖上盖，纵轴摇动5分钟（切忌不要横向摇动，否则溶液乳化）。

   3、称取6g氯化钠，加入斗肚一侧，不要残留在斗塞处。继续振摇，方法同上，5min。主要目的，盐析作用，有利于分层

   4、量取60ml石油醚，加入方法同丙酮，振摇5min，静置一小时。

   5、把上层石油醚液从上面转移到250ml分液漏斗中，尽量多转移一些。下层继续加入30ml石油醚二次萃取，合并石油醚。把下面的浑浊物放掉。

   6、脱水。在小漏斗中塞入少量玻璃毛，目的是防止硫酸钠流下来。加入5g左右的无水硫酸钠。把石油醚溶液加入过滤，脱除有机层中少量的水分，下面用试管接收，氮吹。把所有萃取液吹至近干。

7、溶解。用移液管移入约5ml石油醚，保证试管中溶液为5ml，充分溶解上述浓缩后的样品，超声、混合均匀。

   8、去掉此过程，净化。采用浓硫酸净化的方式，将溶解于石油醚中的杂质通过磺化的方式除掉。加入硫酸后会出现硫酸变黄的现象。可以多加或重复加酸至无色，再将此溶液上机离心，转数约10000转/分钟。

   9、微孔滤膜过滤，上样。将离心净化后的上层石油醚溶液取出至样品瓶中，待测。

八、谱图

DB-5出峰顺序：

α-666、β-666、γ-666、δ-666、pp’-ddd、pp’-dde、op’-ddt、pp’-ddt

DB-1701出峰顺序：

α-666、β-666、γ-666、δ-666、pp’-dde、op’-ddt、pp’-ddd、pp’-ddt

溶剂峰：

 正己烷                                  

苯

单标：

1、a-666

2、r-666

3、o,p’-DDT

4、p,p’-DDT

5混标：四种组分顺序：a-666、r-666、op’-DDT、pp’-DDT

6、8种混标：单针进样

8种混标：多针进样

九、注意事项

1、丙酮的作用——萃取的中间介质

2、试剂要采用优级纯或者更高纯度的试剂，以免由于试剂引入基质造成判断误差

3、标样配置过程中要仔细，否则容易出错

4、如果发现有机相中水分含量较大，则采用柱脱水的效果能更好，不过要事先将玻璃柱用石油醚浸润后上样过滤，减少损失。

5、浓缩过程，建议采取离心后转移全部上层有机相溶剂进行浓缩，能让结果更准确。采用氮吹时，在不加热的条件下吹干即可。

6、国标中的净化过程可以去掉，用硫酸净化的时候容易将溶剂氧化，使回收率低。

7、震荡方式，选择纵向震荡，不易发生乳化现象，否则乳化后几乎不能分层

8、石油醚使用，由于沸点低（30-60℃），容易挥发，需要使用过程注意安全。（个人觉得使用60-90℃沸程的应该也可以，但是没具体做过实验，需要实验数据进行验证。）